《表1 Q-PCR引物序列》

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《LPS诱导的HepG2细胞NOTCH与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的“会话”研究》

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采用实时荧光定量PCR法，将HepG2细胞分为两组，其中一组加入LPS（2μg/ml）模拟酒精刺激48 h，分别收集对照组和实验组细胞，采用TRIzol Reagent RNA提取试剂盒分别提取各细胞总RNA。经反转录后通过PCR方法分别检测NOTCH不同的受体和配体在刺激前后m RNA水平的变化。设计Notch 1、Notch 2、Notch 3、Notch 4，Jag 1、Jag 2，Dll1、Dll 3和Dll 4引物和内参引物（表1）。首先检验各组有无特异性扩增产物，然后在实时荧光定量PCR仪上进行PCR扩增。扩增条件为:95℃3 min，94℃30 s，55℃退火30 s，72℃30 s，35个循环。以ΔCt（目的基因）-ΔCt（内参基因）计算实验组和对照组的ΔCt，按照ΔΔCt=ΔCt（实验组）-ΔCt（对照组）计算m RNA相对水平的差值，即2-ΔΔCt。