《表5 q-PCR鉴定引物序列》

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《利用CRISPR/Cas9技术构建KMT2D基因敲除的人胚胎干细胞系》

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细胞收集后用Trizol裂解，提取细胞总RNA，取2μg反转录成cDNA，利用SYBR Green进行qPCR检测。ACTIN为内参基因。跨越外显子，设计多对q-PCR引物（表5、图3）。通过比较敲除细胞与野生型HN4 KMT2D的mRNA转录本，确认mR-NA层面上KMT2D SET Domain是否被敲除。