《表1 Q-PCR引物序列》

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《miR-129-5p通过BDNF调控多发性骨髓瘤细胞增殖及分泌的机制》

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采用Trizol试剂盒法对组织与RPMI8226细胞总RNA进行提取，并用反转录试剂盒反转录得到c DNA。用实时荧光定量PCR仪行PCR实验，miR-129-5p以U6作为内参，BDNF以GAPDH作为内参，引物序列见表1。反应体系为20μl，包括10μl2×SYBR Mix，10×c DNA模板1μl，上下游引物各1μl，H2O 8μl，每个样品为3个重复，PCR扩增条件为:95℃预变性3 min，95℃变性10 s，60℃退火30 s，72℃延伸2 min，35个循环，72℃再延伸10min。产物经琼脂糖凝胶电泳验证。手动将阈值选定在各对数扩增曲线平行上升的最低点，获得各反应管的Ct值（threshold cycle），数据采用2-ΔΔCt法[20]进行基因相对定量表达分析。