《表2 荧光定量PCR引物序列》

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《响应地黄连作障碍LncRNA-RgAGT2的克隆及表达分析》

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利用Primer Premier 5.0软件设计Unigene29334＿All（209 bp）、LncRNA-RgAGT2与RgAGT2荧光定量PCR引物（表2），以18s为内参基因进行基因表达分析。取膨大前期头茬、连作材料的cDNA作为qRT-PCR的模板，使用荧光定量PCR试剂盒，利用Bio-Rad IQ5荧光定量PCR仪进行扩增。PCR反应体系:cDNA 1μL，正向引物和反向引物各0.5μL，2×TransStart Top Green q PCR Mix 10μL，加水定容至20μL。扩增程序:95℃，5 min；95℃，10 s，58℃，30 s，72℃，30 s，40个循环，熔解曲线程序95℃，1 min，58℃，1min，95℃，10 s，温度以每个循环0.5℃递增，恒温时间30 s。每个样本设置3个生物学重复，用2-ΔΔCt的方法分析不同样品之间基因的相对表达水平。