《表1 树莓ACS基因家族成员克隆引物》

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《树莓1-氨基环丙烷-1-羧酸合酶基因(RiACS)家族成员的克隆及生物信息学分析》

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根据所得电子序列使用Primer Premier 5.0软件设计引物（表1），由北京瑞博兴科生物技术公司合成。取树莓组培苗叶片200 mg使用植物DNA提取试剂盒提取基因组DNA，然后进行PCR扩增，PCR体系为:金牌mix 45μL，上游引物（10μmol/L）2μL，下游引物（10μmol/L）2μL，模板（100ng/μL）1μL。PCR条件为:98℃，2min；98℃10s，Tm（RiACS1-6分别为:54、55、57、52、57、56℃）15s，72℃，45s，35个循环；72℃，5 min。PCR产物经胶回收后连接到pClone007克隆载体并转化大肠杆菌感受态细胞，经过夜培养后挑取单克隆摇菌并进行菌液PCR，使用PCR呈阳性的菌液提取质粒，提取的质粒送北京睿博兴科生物技术有限公司测序。测序所得基因序列使用SnapGene软件分析GC含量，使用Augustus程序（http://bioinf.uni-greifswald.de/augustus/）分析开放阅读框（ORF，Open Reading Frame）和内含子，并获得CDS（Coding Sequences）序列和其所编码的蛋白序列[21]，使用DNAMAN软件比较基因序列和蛋白序列之间的相似性。