《表2 本研究所用的引物》

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《基于CRISPR/Cas9技术对水稻ALOG家族成员的基因敲除突变体的构建》


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参照Ma等(2015)方法,本研究中CRISPR/Cas9基因编辑系统的sg RNA使用的是Os U6a启动子,U6基因由Ⅲ型RNA聚合酶转录,转录的起始点是确定的碱基G。因此,由U6启动子驱动的sg RNA首碱基一定是G,在选择靶点时,如果NGG上游第20个碱基是G,则按常规靶点(Regular target)设计引物,即G下游19个碱基加上接头序列;如果NGG上游第20个碱基不是G,则按非常规靶点(Irregular target)设计引物,即NGG上游的20个碱基加上接头序列进行设计(表2)。