《表2 本研究所用引物信息》

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《孕激素左炔诺孕酮长期低剂量暴露对雄性斑马鱼的生殖毒性》

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本论文研究了暴露雄鱼大脑和性腺中重要受体基因（npr，mprα，mprβ，erα，erβ，ar）的转录水平。每3条雄鱼的精巢或脑混合后作为一个平行样本。按照Han等[24]的方法提取RNA、将RNA逆转录为c DNA及进行RT-PCR检测。采用Trizol（Invitrogen，Carlsbad，CA，USA）提取总RNA，使用NanoDrop-2000超微量分光光度计（Nanodrop Technologies Inc.，Wilmington DE，USA）测定总RNA的浓度，使用PrimeScriptreagent Kit（TaKaRa Bio，Shiga，Japan）合成c DNA。在定量检测之前使用在线工具（http://www.leonxie.com/referencegene.php）评估常用的5个内参基因（rpl8，18s，β-actin，gapdh，ef1α）在LNG暴露下转录的稳定性，并选取转录稳定性最好的rpl8作为内参基因。荧光定量PCR采用日本Toyobo公司（Osaka，Japan）的SYBR Green试剂盒，于ABI 7300（Applied Biosystems，Foster City，CA）进行检测。扩增程序为:95℃×10 min变性，95℃×30 s，60℃×15s，72℃×45 s，35个循环。实验中所用的基因引物序列采用在线引物设计软件Primer 3 program（http://frodo.wi.miT.edu/）设计，引物序列见表2。目的基因转录水平的相对变化使用2-△△CT法进行计算处理。