《表1 本研究所用引物基本信息》

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《四川省红叶石楠炭疽病病原菌鉴定及其潜在侵染源测定》

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将1.2.3中选取的代表菌株在PDA平板上于25℃、12 h光照/12 h黑暗交替条件下活化5 d后，用打孔器分别在形成的菌落边缘打取直径为5 mm的菌饼，分别将菌饼放入PD培养液中，25℃、120 r/min条件下振荡培养2～3 d，收集菌丝后采用真菌基因组DNA抽提试剂盒提取病原菌DNA，于-20℃储存备用。参考Weir et al.(2012）和Damm et al.(2012）的信息设计合成ITS、肌动蛋白（actin，ACT）、3-磷酸甘油醛脱氢酶（glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、几丁质合成酶A(chitin synthase A，CHS-1）、β-微管蛋白（β-tubulin，TUB2）、钙调蛋白（calmodulin，CAL）基因序列的扩增引物，并对病原菌DNA进行PCR扩增，引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成（表1）。25μL反应体系：10μmol/L上下游引物各1.0μL、100 ng/μL DNA模版1.0μL、2×ES PCR Master Mix（每1 mL含40 U Taq酶）12.5μL、ddH2O 9.5μL。反应程序：95℃预变性4 min；95℃变性30 s，各自退火温度下退火30 s，72℃延伸1 min，重复35个循环；72℃再延伸10 min。每次反应均以不含模板DNA的反应体系作为阴性对照。