《表1 本研究所用引物信息》

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《棉花BFT基因的全基因组分析》

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注:下划线部分为限制性内切酶酶切位点。

Premier 3在线网站（http://frodo.wi.mit.edu/）设计Gh BFT1 （GH＿D08G1170）和Gh BFT2 （GH＿D11G0099）基因的qRT-PCR引物（表1）。采用Takara公司的植物多糖多酚RNA提取试剂盒进行棉花样品总RNA提取，超微量分光光度计（NanoDrop 2000c，Thermo）测定各样品RNA浓度并定量反转录RNA量为300 ng，利用M-MLV反转录酶（Promega）合成c DNA第一链。利用美国ABI 7500实时荧光定量PCR仪（Life Technologies，CA，USA）进行Gh BFT基因表达量检测，根据Cham Q SYBR Color q PCR Master Mix （Without ROX）试剂盒（Vazyme），设置反应体系为10.0μL，其中c DNA为2.0μL，上下游引物均为0.2μL，5.0μL的2×Cham Q SYBR Color q PCR Master Mix以及2.6μL的dd H2O。对得到的组织表达和胁迫表达3次重复实验数据分别采用2-△Ct和2-△△Ct法计算基因相对表达量，并利用SPSS 23软件分析显著性差异。