《表2 实验用SNP分型引物》

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《团头鲂hepcidin基因单核苷酸多态性及与抗病性状的相关性》

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SNP位点分型参照文献[16]，在筛选出的hepcidin基因2个SNP位点附近，用Primer premier5.0软件设计分型引物（表2），采用HRM方法在Roche LightCycler480荧光定量PCR仪上进行SNP分型，用LightCycler480软件中的Genescaning程序对结果进行分析。HRM反应设置阴性和阳性2个对照，每个样品均分型3次，之后选取每种类型各2个产物送武汉擎科公司进行测序，以确定产物的具体基因型。SNP分型体系参照文献[18]为:ddH2O 13.1μL，Es Taq 0.2μL，Es buffer 2.5μL，Eva Green 1.0μL，上下游引物各0.4μL，dNTPs（10mmol/L）0.4μL，30ng/μL DNA模板2.0μL，共20μL。SNP分型程序:95℃预变性5min；95℃变性1min，58℃退火10s，72℃延伸15s，重复此循环45次。HRM曲线采集程序:95℃1min；40℃1 min；65℃1s；自65℃起按25次/℃变化率连续搜集荧光值，按0.02℃/s的温度变化率采集熔解曲线，至95℃结束。