《表1 本实验用的PCR引物》

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《水稻arf1基因3′-UTR片段的克隆和验证》


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以β-Actin为内参基因,采用实时荧光定量PCR验证候选基因在不同部位的表达.引物信息见表1.荧光定量PCR反应体系包括:cDNA1μL,浓度为10μmol/L基因特异引物F和R各1μL,SYBR Premix Ex TaqTM(2×)12.5μL,ROX Reference DyeⅡ(50×)0.5μL,用ddH2O补足体积至25μL.扩增程序:95℃30 s,95℃5 s,60℃34 s,共40个循环;每个样本3次平行重复,根据ΔΔCT法(平均相对含量=2-ΔΔCT,ΔCt=Ct目标基因-Ct内标基因)公式计算各基因的相对表达量.