《表1 SNP分型和荧光定量引物序列》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《ITGB5和MUC13基因在产肠毒素大肠杆菌抗性和易感大白仔猪间的差异表达分析》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

首先在屠宰后2 h内收集约10 cm的空肠段，沿其纵轴切开，并用低渗EDTA溶液（5 mmol/L，pH为7.4）清洗。用显微镜载玻片刮擦空肠组织的黏膜表面，并经后续处理制备得到小肠上皮细胞。将小肠上皮细胞刷状缘细胞悬浮液和ETEC F4悬浮液（各0.1 mL）与0.4 mg/mL甘露糖混合，并在室温下孵育30 min。显微镜观察细菌黏附情况，根据黏附到小肠上皮细胞上的细菌个数将49头ETEC F4不黏附的仔猪划分为ETEC F4抗性群体，而小肠上皮细胞与ETEC F4黏附的140头仔猪划分为ETEC F4易感群体，这项工作已经由本课题组其他成员在前期完成[7]。本实验同时对前期通过全基因组关联分析（GWAS）找到的与ETEC F4黏附表型显著关联且位于ITGB5基因和MUC13基因内部的SNP进行基因分型。首先提取小肠组织基因组DNA，分别针对ITGB5基因和MUC13基因的SNP，利用Primer 6和Oligo 6软件设计引物，引物序列见表1。PCR扩增体系为25μL:金牌Mix 22μL，上、下游引物各1μL（10 nmol/μL），DNA模板1μL。反应条件:95℃2 min；98℃10 s，60℃10 s，72℃10 s，30个循环；72℃2 min。随机选择黏附和非黏附个体的PCR扩增产物进行Sanger双向测序并进行基因分型。综合黏附表型与基因分型的结果，最终得到抗性和易感全同胞仔猪各4头用于后续检测基因表达量。