《续表1 MLST分型用CD基因引物》

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《自建分子检测方法在腹泻患者艰难梭菌感染调查中的应用》

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将PCR检测阳性的粪便标本用试剂盒提取菌体基因组，根据查阅文献设计引物，毒素A引物：TcdA-f5′-ATG GAT AGG TGG AGA AGT CA-3′，TcdA-r5′-TAG CTG TAA TGC TTC AGT GG-3′；毒素B引物：TcdB-f 5′-GGC TGA AGC TAA TGC AGA TA-3′，TcdB-r 5′-TTA GCT CTT GCA TCG TCA AA-3′。构建50μL反应体系，其中包括模板2μL，上下游引物各1μL，2×TSINGKE Master MIX 25μL，用ddH2O补至50μL。反应条件：94℃预变性5min，94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸40s，共循环35次，最后72℃延伸10min。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶120V电泳30min，凝胶成像系统观察结果，条带大小正确样品测序验证。