《表1 本实验所用引物：家蚕尿苷磷酸化酶1的克隆与表达分析》

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《家蚕尿苷磷酸化酶1的克隆与表达分析》

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通过Slik DB和NCBI数据库得到家蚕同源基因Bm UPase1及其编码的氨基酸序列。使用Primer Primer5.0软件设计Bm UPase1基因的引物（表1）。25μLPCR反应体系：c DNA模板1μL，上、下游引物各1μL，2×Taq Master Mix 12.5μL，RNase Free dd H2O 9.5μL。反应条件：95℃预变性4 min；94℃变性35 s，49℃退火30 s，72℃延伸90 s，共进行35个循环；72℃延伸10 min。用1%的琼脂糖凝胶电泳检测，经染色后观察并保存实验数据。将目的片段进行切胶，并根据E.Z.N.A.?Poly-Gel DNA Extraction Kit试剂盒进行DNA胶回收，将回收产物连接到p MD19T载体上，转化至DH5α感受态细胞中，经蓝白斑筛选鉴定，挑取单一白色菌落至含Amp(1∶1 000）的LB液体培养基中扩大培养。经菌液PCR鉴定，取阳性克隆产物100-200μL送生工进行测序。将测序结果与数据库中鉴定出的Bm UPase1基因片段序列通过DNAMAN软件进行比对。