《表1 大鼠qRT-PCR引物序列》

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《羊耳菊含药血清对大鼠肝细胞色素P450酶表达的影响》

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不同浓度的羊耳菊含药血清孵育结束后，弃去孵育液，用Trizol和Eastep总RNA提取试剂盒提取各组总RNA。取总RNA 2.0μg，用SYBRPremix Ex Taq TM II、Prime ScriptTMRT试剂盒合成单链c DNA。将c DNA稀释50倍，按说明书用SYBRPremix Ex Taq TM II进行qRT-PCR检测，引物序列见表1。qRT-PCR反应体系为:c DNA模板1.0μL，上下游引物（10μmol/L）各0.8μL，SYBRPremix Ex Taq TMII 10μL，dd H2O补足20μL。反应在CFX96荧光定量PCR仪上进行，PCR扩增程序为:94℃3 min，94℃30 s、56℃30 s、72℃30 s，40个循环；绘制溶解曲线。基因表达数据用内参基因β-actin校正，相对表达差异采用2-△△Ct法分析数据[16-17]。