《表1 实时荧光定量PCR引物》

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《漆酶LAC表达与鸭梨果心褐变的关系》

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以鸭梨中肌动蛋白（Actin）基因（NW＿008988406.1）作为内参基因[24]。根据引物设计原则，使用Primer 5设计LAC14、LAC7、LAC6引物，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。引物序列如表1。依据樊晓岚等[11]的基因定量检测方法，用荧光定量PCR仪（CFX-Connect）确定荧光定量PCR反应体系为：SYBR Premix Ex Taq TMII 12.5μL，Forward Primer2μL，Reverse Primer 2μL，c DNA 1μL，d H2O 7.5μL（反转录之后c DNA已经定量，实时定量取等体积c DNA，即等浓度）。反应程序为：95℃预变性30 s，95℃变性5 s，60℃退火30 s，共计30个循环。最后以鸭梨Actin为内参基因，以初始（贮藏0 d）样品中相关基因表达量为标尺，采用2-ΔΔCt法计算基因相对表达量。