《表3 经UPLC-TOFMS检测得到的PG消化后产物》

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《霍乱弧菌Ⅵ型分泌系统的效应蛋白对细菌细胞壁的降解机制》

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细胞壁PG骨架主要是以交替排列的糖链与其上连接的短肽链组成。为了进一步分析几种水解酶的作用位点以及PG的构成成分，使用溶菌酶和Vgr G3对分离纯化得到的薄膜泡状E.coli MG1655PG进行体外的消化水解，并对消化水解的产物进行分析。实验中发现PG消化水解的产物中有很多不能溶解的成分，但本研究只对可溶解的产物进行了进一步的分析鉴定。因为Tse H没有造成明显的细胞壁水解（图5），无法得到可溶解的产物进行下一步分析，因此聚焦于Vgr G3对PG降解产物的分析。通过UPLC-TOFMS的分析结果鉴定出PG消化后的产物中有3种主要成分：二糖二肽（Disaccharide Dipeptide，Di）、二糖三肽（Disaccharide Tripeptide，Tri）和二糖四肽（Disaccharide Tetrapeptide，Tetra）（图6A）。通过对MASS的检测结果分析得到这3种化合物成分所对应的分子质量，并由此推测出该3种化合物的化学结构式（图6B-6D）。详细的数据见表3。UPLC-TOFMS的结果表明，这3种糖肽是构成PG的重要成分。因此，我们推测效应蛋白Vgr G3通过水解PG多糖链上双糖单位之间的β（1-4）糖苷键来降解PG，使其成为小分子的可溶性片段。