《表1 突变体Y262L引物设计》

  提示：宽带有限、当前游客访问压缩模式

本系列图表出处文件名：随高清版一同展现

《基于分子动力学模拟的高γ-环糊精专一性环糊精糖基转移酶理性改造》

1. 获取 高清版本忘记账户？点击这里登录

1. 下载图表忘记账户？点击这里登录

注：带下划线的序列表示突变氨基酸的编码序列.

使用快速定点突变试剂盒进行实验，设计的引物信息见表1。PCR反应体系（50μL）:5×Fast Alteration Buffer 10μL，Fast Alteration DNA Polymerase（1 U/μL）1μL，正、反向引物（10μmol/L）各2μL，Template DNA 1μL，超纯水补足至50μL。PCR反应条件：95°C 2 min；94°C 20 s，55°C10 s，68°C 2.5 min，30个循环；68°C 5 min。进行定点突变实验之后将PCR反应产物加入1μL的Dpn I，37°C进行消化实验1.5 h。加入350 m L的LB培养基于37°C、150 r/min振荡培养1 h，使菌体复苏，然后转化到E.coli DH5α感受态细胞中。待菌落长出后，进行突变克隆筛选。