《表1 T-DNA插入突变体PCR鉴定引物》

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《水稻穂顶部颖花退化T-DNA插入突变体的分子鉴定及表型特征分析》

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采用CTAB法[10-11]并做改进提取T-DNA插入突变体（T2）叶片基因组DNA。利用3引物PCR法[12]对插入突变体基因型进行鉴定，3条引物分别是GSP-F、GSP-R和TSP（表1、图1A）。引物GSP-F、GSP-R为T-DNA插入位点两侧的、可特异性结合LOC＿Os04g56160基因的序列，TSP则特异结合于T-DNA插入序列。PCR总反应体系为20μL，包括40 ng DNA，2.0μL 10×buffer（Mg2+），1.0μL 10mM dNTP，浓度为10μM的上下游引物各1μL，1U Tag DNA聚合酶。循环参数设置为：94℃预变性5min；接着进行35个循环反应，每个循环包括94℃变性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸10 min；最后72℃下延伸10 min。PCR产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测。