《表1 PCR引物序列：水稻OsCatB敲除突变体的构建及耐逆性初步分析》

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《水稻OsCatB敲除突变体的构建及耐逆性初步分析》

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根据Liu等[18]的方法，利用CRISPR-P 2.0（http://crispr.hzau.edu.cn/）在线工具设计靶标。以OsCatB的第二个外显子作为基因编辑的靶点，遵循gRNA设计基本原则筛选出单靶标CatB-U6a5′-AACAACTCCGCCCTCACCGT-3′；采用Primer5.0软件设计引物CatB-U6a-F和CatB-U6a-R（表1），克隆靶标片段；将靶标连上CRISPR/Cas9中间载体（华南农业大学刘耀光教授提供），随后利用内切酶Nde I和Bam H I（ThermoFisher公司，美国）切下含有靶标的CRISPR表达原件片段；将目标片段与植物载体pCAMBIA1301-GUS（实验室保存）连接后转化进大肠杆菌（E.coli）DH5α感受态中，挑选阳性克隆，交由生工生物工程（上海）股份有限公司进行测序确认。