《表1 构建敲除盒的引物序列》

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《草酸青霉转录因子POX03446对生淀粉酶产量调控的初步研究》

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本研究通过融合PCR法构建草酸青霉POX03446基因敲除盒。以出发菌株草酸青霉ΔPoxKu70的总DNA为模板，用引物对POX03446-L-F/POX03446-L-R和POX03446-R-F/POX03446-R-R（表1）进行PCR，分别扩增POX03446的左臂序列和右臂序列，大小分别为2 578 bp和2 835 bp。以质粒pCPXG418为模板，用引物对G418-F/G418-R（表1）进行PCR，扩增G418抗性基因片段，大小为1 890 bp。通过融合PCR将以上3片段进行融合，再用巢式引物对POX03446-N-F/POX03446-N-R进行PCR扩增，获得POX03446基因敲除盒，大小为5 384 bp（图1），所有PCR产物大小与理论值相符。