《表1 q RT-PCR引物序列》

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《甜菜碱对肥胖小鼠肝脏脂质沉积的影响》


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注:F表示正义链,R表示反义链。

根据Invitrogen公司TRIzol试剂说明书,用TRIzol提取肝组织总RNA。用Nano Drop 2000超微量分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测纯度和完整性。而后,按照Ta Ka Ra公司的m RNA逆转录试剂盒逆转得到相应的c DNA。随后,使用SYBR Premix Ex Taq试剂盒和CFX96荧光定量仪对脂肪酸代谢相关基因进行检测,PCR反应体系10μL:c DNA 1μL,上下游引物各0.5μL,SBYR Premix Ex Taq 5μL,DEPC水3μL。PCR反应条件:90℃预变性10 min,95℃变性10 s,60℃退火30 s,72℃延伸15 s,共40个循环。以β-actin作为m RNA的内参基因,使用2-ΔΔCt[8]方法计算各基因的相对表达量。实验所用引物序列见表1。