《表2 2010—2019年LLC-LC纯化天然花色苷》

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《液液分配色谱及其与液相色谱联用分离天然花色苷的研究进展》

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为了获得更好的分离效率和得到质量分数更高的花色苷单体，近年来采用LLC-LC分离纯化天然花色苷的研究报道逐年增加（表2）。Xu等[36]发现天然花色苷在CCC中的洗脱顺序和在HPLC中完全不同：在CCC分离体系中，花色苷的洗脱顺序主要取决于和苷元以糖苷键相连的糖的结构，连有双糖的花色苷会先于和单糖成苷的花色苷洗脱出来，洗脱顺序依次为桑布双糖苷、芸香双糖苷、半乳糖苷、葡萄糖苷、阿拉伯糖苷。当不同花色苷中与苷元相连的糖相同时出峰顺序则取决于B环取代程度，三取代花色苷先于双取代花色苷洗脱出来，洗脱顺序先后为飞燕草色素、矮牵牛色素、锦葵色素、矢车菊色素、芍药色素、天竺葵色素。对于传统的HPLC分离，花色苷出峰顺序则主要由结构中的氢氧根和甲氧基数目决定，极性大的化合物总是先于低极性化合物洗脱，非酰化花色苷会先于酰化花色苷洗脱，因此花色苷在HPLC中出峰顺序依次为飞燕草色素、矢车菊色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素、锦葵色素。上述洗脱顺序与大部分分离纯化天然花色苷的研究相符合，如Zou等[27]在水-Bu OH-MTBE-ACN-TFA(5∶2∶2.5∶2.5∶0.01）的溶剂系统中利用CCC和制备型HPLC分离天然花色苷的色谱图见图2（Ι、ΙΙ、ΙΙΙ分别为矢车菊素3-O-葡萄糖苷，天竺葵素3-O-葡萄糖苷和天竺葵素3-O-芸香糖苷）。鉴于天然花色苷在CCC和HPLC中的上述保留特性，可以先通过CCC对花色苷提取物进行初步分离，再进一步利用HPLC制备分离得到高质量分数的花色苷单体。如Li等[37]将高速逆流色谱耦合semi-HPLC法，并优化得到最佳分离条件，最终成功从红酒中分离出了4种花色苷单体，质量分数均大于90%。为了获得质量分数更高的花色苷单体，吴奇辉[39]先利用高速逆流色谱对紫马铃薯肉花色苷提取物进行初步分离，再借助制备液相色谱进一步纯化得到的花色苷，最终分离得到2种主要花色苷，质量分数分别为97.8%、97.7%。2019年，张拓等[53]选择EA-BuOH-ACN-0.1%TFA(8∶35∶13∶60）为最佳溶剂体系，先用CCC对茶树紫芽花色苷粗提物进行初步分离，得到总花色苷质量分数为43.64%，进一步结合semi-HPLC成功分离得到5种花色苷组分，质量分数最高达90%，相比只用高速逆流色谱分离得到的花色苷质量分数相比有较大提高，但某些组分因为分离条件的限制仅有20%以上，后续需要对该组分和分离条件做出优化。也有研究把液相色谱作为第一维色谱而逆流色谱作为第二维色谱成功得到了高质量分数的花色苷单体，如Xu等[36]采用semi-HPLC和CCC联用的方法从6种不同的浆果中分离得到了15种花色苷单体，质量分数可达95%。