《表2 用于克隆的引物序列》

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《"棉花内切-β-1,4-葡聚糖酶(EG17)基因的克隆及生物信息学分析"》

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根据NCBI和陆地棉基因组网站上的序列信息，设计合成陆地棉EG17基因的引物（表2），以‘新陆早50号’6个时期棉花叶托组织RNA反转录得到的c DNA为模板，利用PCR技术扩增获得1条大约1 kb的特异条带（图2）。通过DNAMAN软件（8.0.8.789）对测序结果进行蛋白序列的预测，测序结果显示陆地棉EG17基因克隆正确，其ORF为1 533 bp，编码510个氨基酸。借助NCBI的BALST在线工具（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/）对蛋白质结构域进行分析（图3），结果表明陆地棉EG17编码的蛋白质产物中，在第49～596号氨基酸处为一个Glyco＿hygro＿9区域，这个结构域是GH9家族基因所特有的，因此我们确定该基因为GH9家族成员，命名为Gh EG17。