《表1 实时荧光定量PCR引物》

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《玫瑰黄链霉菌活性代谢产物RM诱导黄瓜抗病性的信号转导途径》

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实时荧光定量PCR分析：20μL反应体系：100 ng/μL cDNA 2.0μL、10μmol/L正反向引物（表1）各0.5μL、TransStart Top Green q PCR SuperMix 10μL，ddH2O补足至20μL。反应程序：94℃预变性300 s；94℃变性10 s，56℃或53℃退火15 s（其中基因NPR1、CTR1的退火温度为56℃，基因PR-1a的退火温度为53℃），72℃延伸20 s，45个循环；95℃熔解10 s，65℃熔解60 s，97℃熔解1 s；37℃冷却30 s，以Actin为内参，设3个生物学重复。反应结束后，观察熔解曲线趋势是否正确，根据实时荧光定量PCR仪检测到的CT值，按照2-ΔCT法，计算不同处理时间下黄瓜叶片中目的基因NPR1、PR-1a、CTR1的相对表达量。