《表1 PCR扩增H5N1NP引物》

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《H5N1亚型禽流感病毒核蛋白的原核表达与鉴定》

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使用引物H5N1NP-F和引物H5N1NP-R（表1）对cDNA进行PCR扩增。PCR反应体系（50μl):HF缓冲液10μl，dNTPs 4μl，上、下游引物各2.5μl，cDNA 1μl，DNA高保真酶0.5μl，H2O 29.5μl。循环参数：95℃5min；95℃30s，56℃30s，72℃90s，共35个循环；72℃10min。PCR产物经Kpn I/Not I双酶切消化后克隆入pET-32a-c（+）载体，构建H5N1NP重组质粒，进行双酶切验证和测序分析。