《表1 试验所用引物及其序列》

《表1 试验所用引物及其序列》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《嗜水气单胞菌感染影响中国大鲵核因子45和90表达》


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根据本实验室已测大鲵皮肤转录组的数据得到NF45和NF90的拼接序列,采用Primer Premer5.0设计特异性引物扩增其序列.引物序列见表1,使用高保真PCR试剂盒2*Phanta Master Mix(Vazyme,Nanjing,China)进行PCR反应.PCR的扩增体系为2×Phanta?Master Mix 25μL,模板cDNA 2μL,上下游引物(10μmol/L)各2μL,去离子双蒸水19μL.PCR的扩增程序为95℃预变性5 min;95℃变性30 s,50℃退火30 s,72℃延伸15 s,共34个循环;72℃再延伸5 min.取PCR产物,用1.5%琼脂糖凝胶电泳,EB染色后用凝胶成像仪观察电泳结果.然后对目的片段进行琼脂糖凝胶回收,步骤根据DNA琼脂糖凝胶回收试剂盒(Axygen)进行.