《表1 试验中所用基因及其引物序列》

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《低温胁迫对狗牙根生理及基因表达的影响》

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F:正向Forward；R:反向Reverse.

6) 基因表达分析:采用Trizol试剂盒提取黑麦草叶片总RNA，用Nanodrop 2000检测浓度和纯度，用1%琼脂糖凝胶电泳检测完整性。根据Fermentas cDNA synthesis试剂盒说明书进行反转录合成cDNA。参考TaKara公司的SYBR System操作手册，采用ABI 7500实时荧光定量PCR仪进行PCR扩增。反应程序为:95℃预变性30s，95℃5s，52~55℃20s，40个循环。每个处理设3个重复。基因特异性引物为F/R，以Actin基因为内参，序列参考Hu等[15]的方法进行合成（表1）。根据得到的CT值，利用2-ΔΔCT法，分别计算目标基因在不同处理下的相对表达量。