《表1 试验中所用Ct HSFA9基因引物序列,名称及用途》

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《红花(Carthamus tinctorius)热激转录因子CtHSFA9的克隆及表达分析》

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实时PCR检测系统对基因进行RT-qPCR表达分析。利用Primer 3.0在线引物设计软件（http://bioifo.ut.ee/primer3-0.4.0/）设计荧光定量PCR引物及内参基因CtEF1α引物（内参基因选择根据相关研究选定）（杨晶等，2017）（表1）。荧光定量试验采用Bio-Rad-CFX96实时定量系统，试剂使用SYBR green I master mix（北京天根生化科技有限公司）进行定量PCR反应。反应体系为10μL体系，Real-time PCR反应体系如下：5μL SYBR green I master mix，1μL cDNA，0.5μL正向引物，0.5μL反向引物，3μL Rnase free ddH2O。首先将相同组分混匀配成混合液，之后分别加入不同体系中，以保证反应条件一致性。再加入差异组分。反应条件是：94℃下90 s，随后进行35个循环的94℃10 s；56℃5 s；72℃10 s。通过熔解曲线分析监测PCR扩增的特异性，反应程序从55℃到94℃0.1℃/s速度，对产物进行测序分析。