《表1 引物名称、序列及用途》

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《高羊茅FaGST1基因克隆、亚细胞定位及表达分析》

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根据前期试验获得高羊茅转录组数据基因注释，从中找出高羊茅GST基因对应的Unigene序列，用Premier primer 5.0设计Fa GST1基因的中间片段特异引物FaGST1-F1/FaGST1-R1（表1）。以高羊茅鲜嫩叶片的cDNA为模板，PCR反应体系50.0μL:2×PCR Buffer for KOD FX Neo 25.0μL，2 mmol/L dNTPs 10.0μL，10μmol/L上、下游引物（FaGST1-F1/FaGST1-R1）各2.0μL，cDNA模板1.0μL，KOD FX Neo（1 U/μL）1.0μL，用ddH2O补充至50.0μL。扩增程序：98℃预变性5 min；98℃10 s，60℃15 s，68℃5 min，进行30个循环，4℃保存备用。经1.8%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物并照相记录，置于紫外灯下迅速切下与目的片段大小一致的条带，参照琼脂糖DNA胶回收试剂盒说明回收目的片段，连接至pMD19-T载体，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后涂板，挑取阳性克隆送至生工生物工程（上海）股份有限公司测序。利用DNAMAN 6.0分析测序结果。结合5'-RACE和3'-RACE试剂盒说明设计引物（FaGST1-F2/FaGST1-R2和FaGST1-F3/FaGST1-R3）（表1），然后参照5'-RACE和3'-RACE试剂盒说明进行操作，最终获得高羊茅FaGST1基因的5'端和3'端序列。利用琼脂糖DNA胶回收试剂盒回收纯化目的片段，使用DNAMAN 6.0将5'端和3'端序列与中间片段序列进行拼接，获得FaGST1基因的cDNA全长序列。