《表1 试验中所用引物序列》

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《紫花苜蓿MsGAI的克隆、表达及遗传转化》

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黑体部分为限制性内切酶XbaⅠ与Bam HⅠ的位点The primers blacked are restriction sites XbaⅠand Bam HⅠ

根据蒺藜苜蓿（Medicago truncatula）MtGAI（GenBank登录号XM＿013605137.1）的c DNA序列，设计特异引物MsGAI＿F/R（表1），以紫花苜蓿c DNA为模板进行PCR扩增，反应体系为25μL:cDNA 1μL、KOD-plus 1μL、10×Buffer for KOD 2.5μL、25mmol·L-1 Mg SO4 1μL、2 mmol·L-1 dNTPs 2.5μL、MsGAI引物各0.75μL和PCR grade water 15.5μL。反应程序为94℃5 min；94℃30 s，60℃30 s，72℃2min，34个循环；72℃5 min。产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测、纯化，并与Peasy-T1-Blunt载体连接，转化，挑取单克隆进行菌液PCR验证，阳性克隆送上海英潍捷基生物技术有限公司测序。