《表1 实验所用引物及其序列》

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《盐度胁迫下缢蛏渗透压变化及V-ATPase H基因的表达分析》

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1.2节实验取样同时，分别在实验胁迫后4、8、12、24、48、72、96 h时取盐度20组缢蛏外套膜、中间膜、肝胰腺、足、水管、鳃和唇瓣7种组织用于V-ATPase H基因组织表达特征分析，取盐度胁迫下各个时间段的缢蛏鳃组织用于m RNA表达分析。所有组织样品置于液氮速冻后保存于﹣80℃冰箱中备用。Trizol提取总RNA，使用Ta Ka Ra Prime Script RT reagent Kit反转录成c DNA，产物于﹣20℃冰箱中保存备用。用Primer Premier 5.0软件设计荧光定量引物（表1），所有引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。使用Ta Ka Ra SYBR Premix Ex TaqⅡ试剂以及Light Cycler 480Ⅱ仪进行q PCR反应，结果采用2-ΔΔCt法进行比较分析。实验数据利用SPSS 19.0软件分析，单因素方差分析进行显著性检验，多重比较检测各测量指标的差异，以P<0.05为差异显著。