《表1 大鼠miR-199-3p和U6的引物》

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《miR-199-3p诱导心房纤维化在大鼠心房颤动中的作用》

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1.3.4 RT-qPCR测定左心房miR-199-3p水平利用microRNA抽提试剂盒抽提纯化心肌样本的microRNA。设计与合成miR-199-3p和内参照基因U6的相应引物，见表1。取2μg总microRNA逆转录成cDNA，选用逆转录试剂盒，合成miRNA第一链cD-NA。RT-qPCR反应体系:2μL template cDNA，10μLmaster mix，上下游引物各0.5μL，ROX reference Dye 1μL，加RNase Free Water至20μL。PCR扩增使用ABI 7500，反应条件:95℃预变性30 s，随后进入PCR循环，95℃变性5 s，退火/延伸60℃，30 s，40个循环后，以2-△△Ct法进行数据分析。