《表1 miR-146a、miR-155及内参基因U6引物序列》

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《尿毒症血液透析患者外周血单个核细胞miR-146a和miR-155的表达对其炎性因子的影响及意义》

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向PBMC中加入1 ml裂解液，混匀后静置5 min，加200 ml氯仿，震荡15 s，4℃静置5 min，12 000 r/min离心15 min，将无色水相移至新RNase离心管中，按RNA提取试剂盒说明书操作；逆转录反应:将所得RNA反转录为c DNA，依据试剂盒说明书操作，产物于-20℃冰箱保存。qRT-PCR反应（20μl）:2×SYBR Green PCR Master Mi×10μl，c DNA模板2μl，上下游引物各1μl，H2O 6μl，每个样品做3个复孔。根据目的基因设计对应引物，内参为U6，序列见表1。反应条件:95℃30 s；95℃5 s、58℃30 s，40个循环。采用2-ΔΔCt法计算miR-146a、miR-155相对表达量。