《表1 miR-335-5p ATF2 MMP2及内参基因β-actin U6的引物序列》

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《miR-335-5p和转录因子ATF2在宫颈癌中的表达关系研究》

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取出保存的样本，提取总RNA:对样本超声匀浆，按照RNA提取试剂盒说明书提取总RNA，检测RNA纯度并用琼脂糖凝胶电泳检测其完整度；逆转录反应:将所得RNA按照反转录试剂盒说明操作，反转录为c DNA，产物置于-20℃冰箱保存备用。实时荧光定量PCR:反应体系20μL，10μL2×SYBR Mix，上下游引物各1μL，c DNA模板2μL，H2O 6μL，每个样品做3个重复，反应条件为95℃反应45s，95℃反应10 s、60℃反应30 s，35个循环，72℃延伸10 min，在q PCR仪上进行反应。miR-335-5p以U6为内参；ATF2及MMP2均以β-actin为内参。引物均由宝日医生物技术（北京）有限公司合成。使用ΔΔCt法对结果进行相对定量分析，根据各样本的平均Ct值，采用2-ΔΔCt法计算miR-335-5p、ATF2 mRNA及MMP2 mRNA的相对表达量。miR-335-5p、ATF2、MMP2及内参基因β-actin、U6的引物序列见表1。