《表1 NOTUM及内参基因β-actin引物序列》

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《NOTUM基因在骨肉瘤中的表达及临床意义》

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mR-NA的表达于-80℃冰箱取出组织样本，将样本剪碎装入试管中，加入1 mL TRIzol破碎匀浆，按照TRIzol RNA提取说明书提取组织中总RNA，将所得RNA溶于RNase Free H2O，检测其纯度及浓度。按照Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit说明书进行反转录，所得cDNA置于-20℃保存。qRT-PCR反应体系20μL:2×SYBR Green PCR Master Mix 10μL，上、下游引物各1μL，cDNA模板2μL，H2O 6μL。每个样品做3个复孔。根据目的基因设计对应的引物，以β-actin为内参，引物序列见表1。反应条件：94℃60s，95℃15s，60℃15s，共40个循环。根据各样本的平均Ct值，采用2-ΔΔCt法计算NOTUM mRNA相对表达量。