《表1 Notch1、Jagged1基因及β-actin引物序列》

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《雌激素调控Notch1信号通路对卵巢去势大鼠血管钙化的影响》

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参照文献[4]方法。应用RNA prep pure组织总RNA提取试剂盒提取总RNA。反转录反应体系:总体积为20μL，包括总RNA 4μL，10×PCR buffer 2μL，2.5 mmol/L dNTPmix 4μL，反转录酶1μL，Oligo（dT）4μL，dd H2O补足至20μL，按照反转录说明书合成cDNA。在GenBank中查找上述基因全序列，运用Primer-BLAST设计引物见表1。PCR反应体系:总体积为50μL，包括10×PCR buffer 6μL，2.5mmol/L dNTPmix 4μL，10μmol/L Primer 1 2μL，10μmol/L Primer 2 2μL，模板cDNA 10μL，3u/μL Taq酶1μL，ddH2O补足至50μL。反应条件:94℃2min，94℃25s，60℃30s，40个循环。由PCR反应曲线得到Ct值，定义△Ct=目的基因（Notch1、Jagged1）Ct-内参（β-actin）Ct；△△Ct=待测样品中目的基因（Notch1、Jagged1）△Ct-参照样品中目的基因（Notch1、Jagged1）△Ct，相对样品模板量RQ=2-△△Ct。以相对样本模板量表示单个核细胞Notch1、Jagged1的相对表达量。采用2-△△Ct法计算相对表达量结果。