《表1 p66Shc和β-actin基因引物序列》

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《p66Shc在绵羊卵母细胞中的表达及其与胞质氧化还原稳态的关系》


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分别收集成熟前优质卵母细胞、劣质卵母细胞、常规成熟24 h卵母细胞、老化组的卵母细胞,每组样品收集卵母细胞数为50枚。按照RNeasy Mini kit(Qiagen)微量样品总RNA提取试剂盒提取卵母细胞的总RNA,用Takara反转录试剂盒合成cDNA,并将所得cDNA置于-80℃保存备用。根据GenBank查找绵羊的p66Shc序列和β-actin序列,利用Primer 5.0设计引物,引物序列见表1,由上海生工合成,以反转录得到的cDNA作为模板,以SYBR为荧光染料,用Takara公司的SYBR Premix Ex TaqⅡ进行荧光定量PCR扩增,每组试验重复3次。以β-actin为内参,根据2-ΔΔCt计算p66Shc相对表达量。