《表1 TGF-β1和内参β-actin的mRNA引物序列》

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《敲除核因子E2相关因子对肾肌成纤维细胞活化与纤维化的影响》

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采用TRIzol试剂提取小鼠肾组织中的RNA，于260/280 nm测定吸光度值以确定样本纯度和浓度。根据试剂说明书将RNA反转录成cDNA。应用Primer 5.0软件设计小鼠TGF-β1 mRNA的特异性引物，以β-actin作为内参，引物由上海生工公司合成，见表1。PCR扩增体系：5μL 2×SYBR Green荧光定量试剂、2μL引物（上、下游各1μL，终浓度200 nmol/L）、2μL反应缓冲液、1μL cDNA。PCR程序为：95℃3 min预变性，1个循环；95℃5 s，60℃35 s，40个循环。采用相对定量法计算获得结果，溶解曲线分析结果的可靠性。相对表达量=2-ΔΔCt，ΔΔCt=[Ct目的基因（待测样品）-Ct内参照（待测样品）]-[Ct目的基因（校正样品）-Ct内参照（校正样品）]。