《表1 内参β-actin、NRSN2和EBV-DNA引物序列》

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《血清神经膜蛋白2与鼻咽癌EB病毒抗体及其DNA的相关性分析》

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注:NRSN2为神经膜蛋白2；EBV-DNA为EB病毒-DNA

从血清样本中抽提总RNA，采用TaKaRa公司逆转录试剂盒进行逆转录反应，得到cDNA进行荧光定量PCR，94℃预变性1 min，94℃变性10 s，58℃退火，延伸45 s，循环设置40次，记录荧光值，该目的基因相对表达量经过内参标化后分析。重复3次，结果以循环阈值（cycle threshold，Ct值）公式换算2-△△Ct表示[6]，Ct值表示每个PCR反应管的荧光信号到达设定的阈值所经历的循环数。根据EB病毒BamHI-W片断得到EBV-DNA目的基因，抽提样本中总DNA，严格按照试剂盒说明书操作顺序进行同样的PCR反应，DNA探针序列为:5'-CCTCG-GACAGCTCCTAAGAAGGCACC-3'。NRSN2、内参及EBV-DNA引物序列见表1。EBV-DNA结果判定:PCR结果>5×102copy/ml为阳性表达[7]，PCR结果≤5×102copy/ml为阴性表达。