《表1 CDX2、内参β肌动蛋白、mi RNA-32及U6引物序列》

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《胃癌组织中CDX2和miRNA-32表达与患者预后的关系》

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通过Primer Primier 5.0软件设计CDX2和内参β肌动蛋白引物，委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成，mi RNA-32及内参U6引物委托上海睿安生物科技有限公司设计、合成。引物序列见表1。称取解冻后组织标本40～60 mg，应用TRIzol法提取组织总RNA，随后应用Thermo Scientific Revert Aid TM第一链c DNA合成试剂盒逆转录合成c D-NA。反应体系：Ribo Lock TM Ribonuclease Inhibitor1μL，5×reaction buffer 4μL，Revert Aid TM M-Mu LV Reverse Transcriptase 1μL，10 mmol/L d NTP mix 2μL，DEPC水加至20μL。CDX2和β肌动蛋白反应体系：SYBR Green mix（ROX）10μL，上游引物和下游引物各0.6μL，c DNA3μL，DEPC水加至20μL。mi R-32和U6反应体系：SYBR Green mix（ROX）10μL，上游引物和下游引物各1μL，c DNA3μL，DEPC水加至20μL。反应条件：50℃2 min，95℃10 min，95℃15 s，56℃60 s，40个循环。结果判断[5]：采用比较Ct法进行相对定量分析，以ΔΔCt值表示目的基因相对表达量，ΔΔCt=（样品Ct均值-内参Ct均值）-（对照样品Ct均值-对照内参Ct均值），取2-△△Ct即代表被检样品初始样本m RNA相对含量。