《表1 mi RNA-155, U6引物序列》

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《miR-155在乳腺癌患者组织和血浆中的表达水平及临床意义》

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检测的茎环RT-q PCR方法，以U6作为内参，检测mi R-155表达。相关分析的引物序列如表1所示。取5μl提取的RNA进行反转录。反应体系为:逆转录引物1.0μl，dNTP（10m M each）0.5μl，5 x RT buffer 2.0μl，RNase inhibitor 0.5μl，（40 U/μl） M-MLV（200 U/μl）0.5μl，总体积10.0μl。反应条件为:16℃30min，42℃60 min，70℃15 min，反应结束后-20℃保存。以20μl反应体系进行Real-time定量PCR。mi RNA检测反应体系包括:RT产物1μl，2×SYBR Green I Mastermix 10μl，5μmol/L混合引物4.0μl。反应条件为:95℃30 s后，95℃10 s，60℃20 s，70℃10 s，40个循环，每个样本进行3次重复检测。RT-qPCR结果经公式2-△CT计算目的基因的相对表达量。以2-△△Ct表示样本目的基因的表达相对于对照组的变化倍数，其中△△Ct=（Ctsample-CtU6）试验组-（Ctsample-CtU6）对照组。