《表1 miR-144-3p与U6引物序列》

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《卵巢癌组织中mi R-144-3_p和SGK3表达水平及其临床意义研究》

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取出液氮中冻存的卵巢组织，采用mi RNeasy Mini Kit提取mi RNA，操作严格按照说明书进行。用微量紫外分光光度计检测其纯度及浓度后，取2μg miRNA，采用Taq Man MicroRNA RT Kit合成c DNA。最后，采用Taqman Universal PCR Master Mix检测mi R-144-3p表达水平，20μl体系配制如下:10μl Taqman Master Mix、1μl Taqman miRNA assay Mix、1.5μl cDNA、7.5μl ddH2O；混匀后置于实时荧光定量PCR仪（美国Beckman Couhe公司）中进行扩增；反应条件:50℃2 min；95℃10 min；95℃15 s，60℃1 min，进行40个循环。选取U6为内参，进行3次生物学重复。采用2-ΔΔCT法分析qRT-PCR结果，ΔCT=（CTmiR-144-3p-CTU6）±标准差；ΔΔCT=（ΔCTmi R-144-3p-ΔCTU6）±标准差。分析结果时，以中位值为界，分为miR-144-3p高表达组（包括中位值）和低表达组。miR-144-3p与U6引物序列见表1。