《表1 miR-125b与U6引物序列》

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《子宫内膜癌中microR-125b和高迁移率族蛋白A1的表达水平及临床意义》

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取出液氮冻存的子宫内膜组织，严格按照MirVanaTMmiRNA提取试剂盒说明书提取子宫组织miR-NA，用微量紫外分光光度计检测其纯度及浓度，若OD260/OD280处于1.8～2.0之间则认为RNA样品合格。取2μg RNA，用Taqman microRNA反转录试剂盒进行cDNA合成。合成cDNA后，用Taqman U-niversal PCR Master Mix检测miR-125b表达，首先进行20μl体系的配制:Taqman Master Mix 10μl、Taqman miRNA assay Mix 1μl、cDNA 1.5μl、ddH2O7.5μl，混匀后，置于实时荧光定量PCR仪上扩增，反应条件:50℃2 min；95℃10 min；95℃15 s，60℃1 min，进行40个循环。选取U6为内参，进行3次生物学重复。采用2-ΔΔCT法分析qRT-PCR结果，ΔCT=CTmiR-125b-CTU6；ΔΔCT=ΔCT实验组-ΔCT对照组。miR-125b与U6引物序列见表1。