《表1 miR-138以及内参U6引物序列》

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《MiR-138在脑胶质瘤患者血清表达的生物学效应及临床意义》

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利用血清miRcute miRNA提取分离试剂盒（DP501，北京天根生化科技有限公司），按照说明书中的标准操作流程分离提取血清标本中的miRNA。以miRNA为模板，通过cDNA合成试剂盒（Thermo Scientific Inc，美国）进行逆转录，其具体反应体系（10μL）:2μL总RNA，3μL超纯水，1μL引物，充分混匀后67℃孵育5 min后置于冰上；加入0.5μL逆转录酶，0.5μL RNase抑制剂，1μL dNTP以及2μL逆转录缓冲液，充分混匀后按42℃50 min，80℃5 min体系进行逆转录。通过Maxima SYBR Green qPCR Kit试剂盒（Thermo Scientific Inc，美国），采用qRT-PCR的方法对2组血清样本中的miR-138的表达水平进行检测。其反应体系（20μL）:2μL c DNA，6μL超纯水，10μL SYBR Green反应缓冲液，1μL上游引物，1μL下游引物；反应条件如下:94℃3 min，94℃20 s，60℃30 s，73℃30 s，共40个循环。所有检测结果均采用2-ΔΔCt的方法进行分析。反应中所使用引物序列设计如表1。