《表1 PCR引物序列:微小RNA-155/含有SH2结构的5肌醇磷酸酶-1与非酒精性脂肪性肝病患者发生心血管事件的相关性》

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《微小RNA-155/含有SH2结构的5肌醇磷酸酶-1与非酒精性脂肪性肝病患者发生心血管事件的相关性》


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采用荧光定量PCR法检测miR-155及SHIP-1 mRNA,采用Trizol法提取外周血全血总RNA,测定RNA浓度、纯度以及完整性,采用Ta KaRa公司RNA逆转录试剂盒将RNA逆转录成c DNA。采用引物设计软件Premier5.0分别设计mRNA及基因荧光定量PCR引物,具体见表1,引物合成由上海生工生物技术有限公司完成。以25μl/孔qPCR反应体系进行荧光定量PCR反应,包括12.5μl SYBR Premix Ex TaqⅡ(2×)、1.0μl Gol Forward Primer、1.0μl Uni-miR qPCR Primer、0.5μl ROX Reference Dye(50×)、2.0μl c DNA溶液、8.0μl dH2O。反应条件为95℃30 s预变性,95℃5 s、60℃11 s共进行40个循环。PCR扩增产物进行琼脂凝胶电泳,以GAPDH作为内参基因,采用△△Ct法计算基因相对表达量。