《表1 特异性引物与引入的酶切位点》

《表1 特异性引物与引入的酶切位点》   提示:宽带有限、当前游客访问压缩模式
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《沉默VHA-c4基因对拟南芥根长和种子萌发的影响》


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拟南芥基因组DNA的提取方法采用CTAB法(Murray and Thompson,1980),以提取的g DNA为模板PCR扩增VHA-c4目的片段。正义链(Sense)特异引物为c4-s-5和c4-s-3,反义链(Anti-sense)特异引物为c4-as-5和c4-as-3(表1)。凝胶纯化回收PCR产物,利用XhoⅠ和Eco RⅠ双酶切的方法将正义链和pHANNIBAL载体连接,测序鉴定正确命名为pHAN-c4-s。同理,利用XbaⅠ和Bam HⅠ双酶切方法将反义链与载体pHAN-c4-s相连接,测序鉴定正确命名为pHAN-c4-s-as。最后,用NotⅠ单酶切pHAN-c4-s-as质粒,回收包含35 S启动子、ocs终止子、c4-s和c4-as片段的片段,并与经NotⅠ酶切pART27载体的回收片段相连接,测序正确的重组表达载体命名为pART-c4。