《表1 特异性引物与酶切位点》

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《拟南芥VHA-c1基因对非生物胁迫的响应》

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采用CTAB法[11]提取拟南芥基因组DNA，以其为模板PCR扩增VHA-c1目的片段。正义链（Sense）特异引物为c1-s-5和c1-s-3，反义链（Anti-sense）特异引物为c1-as-5和c1-as-3，具体的引物序列与引入的酶切位点见表1。凝胶纯化回收PCR产物，利用XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切的方法将正义链和p HANNI-BAL载体连接，测序鉴定正确命名为p HAN-c1-s。同理，利用XbaⅠ和Bam HⅠ双酶切方法将反义链与pHAN-c1-s载体相连接，测序鉴定正确命名为pHAN-c1-s-as。最后，用NotⅠ单酶切p HAN-c1-s-as质粒，回收包含35S启动子、ocs终止子、c1-s和c1-as片段，并与经NotⅠ酶切p ART27载体的回收片段相连接，测序正确的重组表达载体命名为pART-c1。