《表1 引物序列及酶切位点Tab 1.Primer sequences and restriction sites》

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《铜绿假单胞菌RhlR抗血清制备》

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用细菌基因组试剂盒提取PA模式菌株PAO1全基因组，以其为模板扩增rhlR基因，引物序列及酶切位点见表1，引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。PCR反应条件:94℃预变性5 min；94℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸50 s，共30个循环；72℃延伸10 min。回收PCR产物并进行双酶切，分别与经同样酶酶切的载体pGEX-4T-1和p ET-22b连接，转化至E.coli DH5α感受态细胞中，筛选具有Amp抗性的转化子。利用载体测序引物（见表1）对菌落进行PCR扩增，鉴定含有rhlR表达载体的菌落。提取阳性克隆质粒，进行双酶切鉴定并送上海桑尼生物科技有限公司测序，测序正确的质粒分别命名为pGEX-4T-1-rhlR和pET-22b-rhlR。将上述表达载体分别转化至E.coli BL21感受态细胞中，获得相应的基因工程菌。