《表1 引物序列Tab.1 Primer Sequences》

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《三脚风炉水提物对痛风性关节炎大鼠NLRP3炎性体及炎症因子的影响》

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造模48h后将大鼠断颈处死，快速分离大鼠受试侧踝关节及周围软组织，将组织剪碎，在碾钵中加入液氮，进一步将组织研磨成粉末，按照RNA提取试剂盒说明书提取RNA，然后分别根据基因库中mNLRP3、mASC、mcaspase-1和mβ-actin核苷酸序列设计引物，委托生工生物工程（上海）有限公司合成，引物序列见表1。将RNA转录成cDNA后，使用SYBR GreenⅠ实时定量PCR对上述mRNA表达量进行检测。反应结束后分析基因扩增的Ct值，以β-actin为内参，计算目的基因相对表达量2-ΔΔCT，计算公式如下:△CT=目的基因CT值-内参基因CT值，ΔΔCT=ΔCT实验组-ΔCT对照组。PCR产物扩增的特异性通过熔解曲线进行分析，以消除引物二聚体等副反应产物的影响。反应条件为预变性94℃1min，变性95℃10s，退火58℃10s，延伸72℃10s，共40个循环，最后72℃延伸5min。每个标本检测3个复孔。